Документально известен с 1566 г. как освященный во имя свв. Флора и Лавра. В 1712 г. в число здешних насельниц вошли инокини упраздненной Вознесенской обители, что стояла напротив Св. врат Киево-Печерской Лавры. Флоровские сестры унаследовали и угодья Вознесенского монастыря, которых тот особенно много получил при игумений Марии Магдалине Мазепиной — матери гетмана Украины Ивана Мазепы. В XVIII-XIX вв. во Флоровской обители жили выдающиеся в русской истории подвижницы благочестия.
С 1758 г. здесь до самой кончины трудились, приняв постриг с именем Нектарии, княгиня Наталия Долгорукова (1714-1771 гг.; погребена в Киево-Печерской Лавре), дочь сподвижника Петра I Б. Шереметева. Когда сватавшийся к ней и любимый ею князь И.А. Долгорукий оказался в бироновской опале, она не отказалась стать его супругой и отправилась с мужем в ссылку. В 1739 г. И.А. Долгорукий был казнен. Мужественно перенеся все страдания, княгиня описала их в «Своеручных записках» (изданы в 1810 г.) и стала таким образом первой российской мемуаристкой, чья жизнь была примером великого смирения. Свое обручальное кольцо Н. Долгорукова, по преданию, бросила перед постригом в Днепр. Ок. 1760 г.
В монастыре приняла иночество и в видении получила указание Божией Матери основать в России четвертый удел Пречистой на земле — Серафимо-Дивеевскую обитель- подвижница Александра Мельгунова. Свой монашеский путь начала во Флоровском монастыре и блаженная Ирина Зеленогорская. Подвижницей благочестия была флоровская постриженница (с 1856 г.) и игумения (с 1865 г.) Парфения (Адабаш; 1808-1881 гг., погребена в обители) — духовная дочь и первый биограф преп. иеросхимонаха Парфения Киевского (ум. 1855 г.), духовная поэтесса, автор одобренной Свящ. Синодом Русской Православной Церкви службы свв. Кириллу и Мефодию. К числу флоровских подвижниц относится и инокиня Елена (Бахтеева; +1834 г.).
В 1929 г. монастырь был закрыт, а в 1941 г. возрожден. В обители произошло первое чудо (исцеление глухонемой девочки) от хранившейся здесь келейно в 1961-1992 гг. великой киевской святыни — иконы Божией Матери «Призри на смирение», прославившейся в 1993 г. передачей своего негативного отпечатка на стекло киота. В центральной части монастыря на одной оси расположены (с северо-востока на юго-запад): колокольня над Св. вратами (вход с ул. Притиско-Никольской; возведена в несколько этапов в 1732-1821 гг.; классицизм), Вознесенский храм (1722-1732 гг.; трехглавый, сочетает черты крестовокупольной церкви с характерным для деревянного украинского зодчества расположением куполов по одной продольной оси) с правым приделом во имя Казанской иконы Божией Матери (в прошлом — во имя Собора пресвятой Богородицы) и церковь св. Николая Мирликийского (до 1857 г. — свв. Флора и Лавра; старейшее из сохранившихся зданий обители, прямоугольное в плане, с единственной главой на выступающей вблизи юго-западного угла апсиде; первый ярус- XVII в., второй — 1818 г.).
Западнее Николаевского храма — одноглавая церковь-ротонда во имя Воскресения Христова (1824 г., классицизм; после возрождения монастыря престол внутри не восстанавливался). У северо-восточной стены, под застекленным балдахином — могила инокини Елены (Бахтеевой). Гроб, в котором почивает подвижница, изготовил для себя святитель Тихон Задонский. Когда на тело усопшего иерарха возложили праздничные архиерейские облачения, этот гроб оказался тесен и, замененный другим, при раздаче имущества святителя бедным достался инокине Елене.
От Воскресенского храма устроен подъем на Замковую гору. Имея со всех сторон крутые склоны, она отделена от соседних высот широкими ярами и в свое время была весьма удобна для строительства крепости. Есть основания предполагать, что именно на этой горе был основан Киев. В XIV в. она снова становится городским детинцем — здесь появляется литовский деревянный замок. В сер. XVII в. гора получила второе название — Киселевка — по имени жившего в замке главы польской администрации города А. Киселя. Тогда же замок был сожжен и гора опустела. Со временем она отошла во владение монастыря и стала называться еще и Флоровской. В 1854-1857 гг. здесь возвели каменную церковь Св. Троицы (сохранились только фундаменты) и основали при ней монашеское кладбище (с XIX в. до 1960 г. на горе действовало и гражданское). В юго-восточной части обители восстанавливается перестроенный в советское время под фабрику одноглавый храм во имя Казанской иконы Божией Матери (1841-1844 гг.).
Как и в былые времена, Флоровский монастырь является своекоштным (необщежительным).
На месте сгоревшей в 1718 г. деревянной церкви в 1722 г. был заложен большой каменный храм во имя Вознесения Господня, который был закончен постройкой в 1732 г. и тогда же освящен Рафаилом Заборовским.
Церковь одноэтажная, трехкупольная, типичной украинской архитектуры; купола имеют просторные, круглые в плане, световые барабаны, из коих средний покоится на четырех столбах. Двухъярусные главы, благодаря необычайно высокому поясу, имеют необыкновенно праздничный вид.
Снаружи храм оштукатурен; живопись иконостаса и стенопись испорчены подновлением в конце XIX века.
Церковь имеет три придела; главный иконостас барочный, пятиярусный (10х20 арш.), деревянный, крашеный, с золоченой резьбой; возобновлен в 1901 г.; иконостасы приделов также деревянные, четырехярусные.
Колокольня «ампирная», трехъярусная, построена архитектором Меленским; проект, хранящийся в монастыре, помечен 1818 г. Колоколов десять.
Лукомский Г.К. «Киев: церковная архитектура XI-XIX века; византийское зодчество; украинское барокко». Описание некоторых церквей (Составлено по материалам церковных описей выполненных архитектурной секцией «отдела искусств» Народного комиссариата просвещения в 1919 г.). — Мюнхен, 1923 г.
