Церковь стояла на подгорной Успенской улице в непосредственной близости от берега Волги и являлась основой Успенского монастыря. В период осады городской крепости войсками Степана Разина в 1670 году как Успенский монастырь, так и церковь были сожжены и разрушены. В 1673 году на месте этой церкви была возведена новая каменная церковь во имя Успения Божией Матери с приделом во имя святителя и Чудотворца Николая, которая была освящена в 1674 году. При церкви, включенной в состав Успенского монастыря, был организован причт, обслуживавший прихожан подгорной части города.
В 1724 году Успенский монастырь был закрыт, а церковь просуществовала до 1826 году, после чего ее прихожане и сама церковь были приписаны к Петропавловской церкви. В 1854 году Успенская церковь Святейшим Синодом была отдана старообрядцам, присоединившимся к Православной церкви на правах единоверия. В церкви были восстановлены причт и приход. Однако в 1866 году из-за продолжавшегося переселения жителей из береговой части города эта церковь также была разобрана и перенесена в нагорную часть города, на ее месте построена часовня.
Новая каменная Успенская церковь была построена в 1867 году на углу Ново-Казанской улицы, ныне Гагарина и Миллионной улицы, ныне утрачена. Сейчас на этом месте стоит пятиэтажный жилой дом. Эта церковь просуществовала до 1930-х годов. Ее историко-мемориальное значение связано с тем, что она формировала одну из старых улиц города, переходящую в дорогу на Казань, по которой проезжал в 1833 году А.С. Пушкин в г. Симбирск. Первоначальное расположение церкви на берегу Волги способствовало формированию живописного силуэта нижней набережной в течение с 1649 года по 1866 год.
Новое расположение Успенской церкви на Ново-Казанской улице с 1867 года создавало высотный путевой акцент, а также обогащало вертикальный силуэт города с северо-западной стороны. С западной стороны размещалась колокольня, затем трапезная и храм в виде восьмерика на четверике. «Построена наподобие корабля, в византийском стиле; снаружи и изнутри оштукатурена, покрыта листовым железом, окрашена медянкою.
Успенская церковь была освящена в 1868 году, в ней размещалось три престола: в холодном отделении был главный во имя Успения Божией Матери, с южной стороны — во имя Покрова Пресвятой Богородицы, с северной стороны — трапезная во имя Святителя и Чудотворца Николая.
